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染色体原位杂交实验的基本原理是利用特定标记的已知碱基序列的核酸探针,依据碱基互补配对原理,与中期染色体玻片标本中的同源 DNA 序列进行杂交。
标记可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),然后进行放1射自显影;也可以用非放1射性的荧光素生物素、地1高辛,再用荧光显微镜进行观察,即荧光原位杂交(fluorescent in situhybridization,FISH)技术。
原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的MABT溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlMABT置换,25分钟,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,后用1mlMABT溶液置换,25分钟。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。